8(495)120-60-59
г. Москва, Научный проезд, дом 17, офис 5-2

Видео

21.02.2017 AgraQuant Mycotoxin ELISA

21.02.2017 AgraStrip Allergen

21.02.2017 AgraStrip Gluten G12

Новости

Особенности комплексной диагностики инфекционной анемии лошадей в неблагополучных пунктах в современных условиях на примере хозяйств Омской области

Особенности комплексной диагностики инфекционной анемии лошадей в неблагополучных пунктах в современных условиях на примере хозяйств Омской области

Особенности комплексной диагностики инфекционной анемии лошадей

в неблагополучных пунктах в современных условиях на примере хозяйств Омской области

Полижаевская, М.И., Плешакова, В.И., Машин, А.В., Лещёва, Н.А.
Polizhaevskaya, M., Pleshakova, V., Mashnin, A., Lescheva, N.

Резюме: в статье приведены результаты диагностики ИНАН лошадей с применением РДП и ИФА, показана большая чувствительность и специфичность последнего при мониторинговых исследованиях.

Ключевые слова: лошади, инфекционная анемия лошадей (ИНАН), диагностика, РДП, ИФА

 

 

Features f ull machining diagnostics equine infectious anemia in distressed areas and current condition on the example of farms Omsk region

 

Summary: the results of diagnostic EIA of horses using RDP and ELISA , shows high sensitivity and specificity of the last course of monitoring research.

Keywords: horse, еquine infectious anemia (EIA), diagnostics , RDP , ELISA


Введение

Инфекционная анемия лошадей (ИНАН, болотная лихорадка) – вирусное заболевание лошадей,характеризуется анемией, поражением органов кроветворения, тромбоцитопенией, лихорадкой и продолжительным бессимптомным носительством возбудителя инфекции.

Несмотря на то, что первые сообщения об ИНАН лошадей относятся к 1841-1843 гг., на сегодняшний день вопросы контроля данной инфекции в России продолжают оставаться актуальными [1].

Причиной этого, с одной стороны, по мнению ряда авторов, является персистенция возбудителя в организме лошадей, больных хронической и латентной формами инфекции, в течение порядка 18 лет [2, 3, 5].

С другой стороны, напряжённость эпизоотической ситуации в России по выше указанной инфекции, в отличие от других заболеваний, отчасти может определяться отсутствием специфической вакцино-профилактики болезни.

Вследствие этого большое значение придаётся прижизненной диагностике ивыявлению инфицированных лошадей, особенно в рамках проведения мониторинговых исследований [6, 7].

Целью исследования явилась сравнительная оценка диагностической ценности ряда методов мониторинга ИНАН лошадей на примере хозяйств Омской области.

 

Материалы и методы

В работе рассматривались эпизоотологический, клинический, иммунологический, патологоанатомический и серологический методы диагностики ИНАН лошадей.

Информация об эпизоотологии ИНАН лошадей в Омской области была получена на основании анализа данных статистической отчётности (по форме №1-ВЕТ, №1-ВЕТ-А) Главного управления ветеринарии Омской области о заразных болезнях.

Клиническую диагностику ИНАН в ряде хозяйств, неблагополучных по указанному заболеванию, проводили путём осмотра лошадей.

Количество общего белка, альбуминов,глобулиновых фракций и гемоглобина определяли согласно методическим рекомендациям [8].

Патологоанатомические и патогистологические исследования проводили с учётом методических разработок [9, 10].

Согласно современным руководствами инструкциям референтным методом в диагностике ИНАН является реакция диффузной преципитации (РДП, тестКоггинса).

В качестве альтернативного метода серологического скрининга серопозитивных к вирусу ИНАН лошадей использовали метод ИФА, предлагаемый фирмой IDEXX в виде набора EIA cELISA Ab.

 

Р езультаты эксперимента и их обсуждение

В период с 2011 по 2015 годы в Омской области имели место шесть неблагополучных очагов по ИНАН. Причём в ряде северных районов области (Колосовском, Муромцевском,Большереченском) неблагополучие по указанному заболеванию сохраняется на протяжении нескольких лет. При этом регистрируется появление новых случаев заболевания ИНАН в хозяйствах, граничащих с неблагополучными пунктами.

Клиническое обследование лошадейиз неблагополучных пунктов (42 головы) не выявило животных с характернымипризнаками в какой-либо фазе (форме) заболевания. Данный факт может свидетельствоватьлибо о скрытом (иннапарантном) течении болезни, либо о нахождении лошадей в состояниивирусоносительства.

Подтверждением вышесказанному служат результаты серологического мониторинга, согласнокоторому из 2510 проб сыворотки крови лошадей Омскойобласти, тестированных в данном исследовании, серопозитивными по результатам реакции диффузной преципитации(РДП) оказались 11,0% образцов. Повторное исследование, согласно МУ, сывороток крови лошадей, давших положительный результат в РДП, в 100,0 % случаев подтвердило его.

При этом вряде случаев учёт результатов РДП вызывал определённые сложности из-за наличия нескольких линийпреципитации в отношении тестируемой сыворотки крови, что, на наш взгляд, обусловлено свойством специфического антигена, входящего в состав набора.

Для устранения этого фактора, а также для изучения возможности использования метода дополнительной диагностики ИНАН лошадей в случае получения положительных и/или сомнительных результатов в РДП, апробировали метод иммуноферментного анализа (ИФА),предусматривающий применение моноклональных антител (МА) к белку р26 вышеуказанного возбудителя и высокоочищенного специфического антигена р26 вируса ИНАН лошадей, что лежит в основе диагностического набора EIA cELISA Ab фирмы IDEXX.

Результаты ИФА совпали с установленными в РДП. При этом отличительной чертой метода ИФА, делающей его более привлекательным по сравнению с РДП при диагностике ИНАН лошадей, явилось сочетание в данном методе МА,полученных к уникальным антигенным детерминантам р26 вируса ИНАН лошадей, и автоматического учёта результатов реакции.

Работа на наборе EIA cELISA Ab фирмы IDEXX, подразумевающем включениев свой состав высокоаффинных имму-нореагентов и роботизированного учёта результатов реакции, ведёт к повышению специфичности используемого метода и минимизации возможного влияния человеческого фактора.

Другим интересным моментом применения набора EIA cELISA Ab фирмы IDEXX на основе ИФА, по сравнению с РДП, явилось несколько большее количество серопозитивных лошадей к вирусу ИНАН,выявленных в результате массового скрининга на примере хозяйств Колосовского района Омской области. Так, по результатам проведённых лабораторных исследований из 431 пробы сыворотки крови лошадей, по данным ИФА, 52 (12,6%) оказались сероположительными, в тоже время по результатам РДП обнаруживалось 44 (10,2%). Чувствительность метода ИФА составила 82%, тогда как РДП – 75,6%.

Необходимо учитывать, что преципитирующие антитела к вирусу ИНАН в диагностическом титре начинают образовываться на 14-30 сутки после инфицирования животного, достигая своего диагностического значения к 48 суткам, и сохраняются на протяжении последующих 7 лет [4]. По всей видимости, спектрантител, обнаруживаемых набором EIA cELISA Ab фирмы IDEXX, продуцируется раньше преципитирующих.

Применение высокоочищенного антигена р26 в качестве одного из компонентов набора, предусматривающего использование конкурентного метода ИФА,способствует повышению чувствительности ИФА в 5-10 раз по сравнению с обычно принятым тестом РДП [4].

Важным звеном в комплексной диагностике болезней животных, в особенности вирусной этиологии, является контроль показателей естественной резистентности организма. Так, проведённые иммунологические исследования у животных с латентным течением инфекционной анемии лошадей показали, что по сравнению со здоровыми животными у них наблюдается увеличение количества иммуноглобулинов,что связано с реакцией организма на персистенцию в нём вируса ИНАН. В тоже время, содержание общего белка, уровень альбуминов β- и α-фракций глобулинов, а также гемоглобина у больных лошадей несколько снижен. Кроме того, наблюдается достоверное повышение уровня циркулирующих иммунокомплексов.

Следующим этапом работы явилось изучение информативности манифестных признаков инфекции при патологоанатомическом анализе внутренних органов (селезёнка, печень, лимфатические узлы, почки, лёгкие, сердце) восьми вынужденно убитых лошадей с предварительно установленным диагнозом на ИНАН. В ходе исследования у трёх животных установлено, что видимые патологические изменения, обусловленные возбудителем ИНАН, характеризовались рядом общих явлений септического характера. Вместе с тем, гистологические изменения в органах и тканях больных лошадей не являлись строго специфическими для данного заболевания и выражались в нарушении обмена ферропигмента и пролиферативно-воспалительной реакции ретикулоэндотелия органов.

В то же время, проведённые патогистологические исследования показали, что у лошадей с латентным течением инфекции с высокими титрами специфических антител (1:64) и низким соотношением альбуминов и иммуноглобулинов в организме наблюдаются изменения, характерные для ИНАН. Указанные особенности имеют определённое диагностическое значение для выявления лошадей с повышенным риском развития патологического процесса.

У остальных пяти лошадей патологоанатомических изменений, свойственных ИНАН, не установлено, что указывает на нахождение значительного процента животных (62,5 % от общего числа вынужденно убитых лошадей) в состоянии вирусоносительства без инициации развития патологического процесса.

 

Выводы

Анализируя данные, полученные в ходе данного исследования, можно отметить, что в настоящее время на территории Омской области существует ряд стационарно неблагополучных очагов по ИНАН лошадей, которые представляют потенциальную угрозу в отношении выноса и дальнейшего распространения возбудителя заболевания.

Причиной тому, с одной стороны, является протекание ИНАН лошадей в виде скрытой инфекции и в форме вирусоносительства. С другой стороны, поддержание инфекционного процесса обеспечивается как наличием в неблагополучных очагах кровососущих насекомых, которые являются механическими переносчиками возбудителя, так и неполным обнаружением и исключением серопозитивных животных из популяции.

При этом ни один из составляющих алгоритма диагностики ИНАН лошадей (эпизоотологический анализ, клиническая диагностика,патологоанатомические изменения), за исключением серологической диагностики, не являются информативными.

Вместе с тем, результаты исследований у большинства лошадей показали, что развитие инфекционного процесса (повышение титра специфических антител в РДП) сопровождается угнетением защитных функций организма и развитием аутоиммунного процесса. То есть данные показатели с учётом соотношения альбуминов и глобулинов и уровня титра РДП могут быть использованы как вспомогательные тесты для выявления животных с повышенным риском развития патологического процесса при ИНАНлошадей.

Сравнивая метод РДП, используемый в настоящее время в практике государственных ветеринарных лабораторий, с альтернативным ИФА на основе МА фирмы IDEXX,следует отметить большую чувствительность и специфичность последнего. Данный факт указывает на пригодность набора EIA c ELISA Ab для серологического скрининга ИНАН лошадей в неблагополучных пунктах, особенно в рамках проведения оздоровительных мероприятий, а также при перемещении лошадей как внутри страны,так и при межгосударственном экспорте и импорте животных.


Скачать публикацию