8(495)120-60-59
г. Москва, Научный проезд, дом 17, офис 5-2

Видео

21.02.2017 AgraQuant Mycotoxin ELISA

21.02.2017 AgraStrip Allergen

21.02.2017 AgraStrip Gluten G12

Новости

ЭФФЕКТИВНОСТЬ ТЕСТ-СИСТЕМЫ ИФА IDEXX В СЕРОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКЕ БРУЦЕЛЛЕЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА В СТАДАХ, НЕ ПОДВЕРГШИХСЯ ВАКЦИНАЦИИ ПРОТИВ ДАННОЙ ИНФЕКЦИИ

ЭФФЕКТИВНОСТЬ ТЕСТ-СИСТЕМЫ ИФА IDEXX
В СЕРОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКЕ БРУЦЕЛЛЕЗА
КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА В СТАДАХ, НЕ ПОДВЕРГШИХСЯ

ВАКЦИНАЦИИ ПРОТИВ ДАННОЙ ИНФЕКЦИИ
Алеся Сергеевна Димова, к.в.н., доцент,  alesya-77@mail.ru
Дмитрий Александрович Сизов, младший научный сотрудник ФГБУН Сибирский Федеральный научный центр агробиотехнологии РАН. Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока (Новосибирская область, п. Краснообск), referent@ievsidv.ru
Александр Валентинович Машнин, к.в.н., региональный представитель mashnin.a@list.ru ООО «ЗИП-И» по Уралу, Сибири, Дальнему Востоку и странам СНГ (г. Омск)
Виктор Иванович Воробьев, ветеринарный врач-эпизоотолог Корпорация «Восток-Молоко» (г. Усть-Каменогорск, Республика Казахстан).

Тест-система ИФА IDEXX Brucellosis Serum Ab Test (Brucellosis Antibody Test Kit), обладая специфичностью и высокой диагностической чувствительностью, имеет перспективы широкого использования в ветеринарной практике для диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота среди не подвергавшегося иммунизации против бруцеллеза поголовья.

Summary

The IDEXX Brucellosis Serum Ab Test (Brucellosis Antibody Test Kit), providing specificity and high diagnostic sensitivity, has prospects of wide use in veterinary practice for diagnostic of bovine brucellosis in non-vaccinated livestock.

Введение. Бруцеллез – опасная зооантропонозная инфекция, имеющая большую территорию распространения и не теряющая свою актуальность до настоящего времени. Лечение бруцеллеза у сельскохозяйственных животных, в частности у крупного рогатого скота, официально не регламентировано.
Принципиально важным звеном в системе противобруцеллезных мероприятий является массовая серологическая диагностика, способная обеспечить своевременное и максимально полное выявление инфицированных животных в неблагополучном стаде, что дает возможность осуществить их оперативную изоляцию и тем самым препятствовать дальнейшему распространению возбудителя. В РФ официально регламентированными серологическими диагностическими тестами при бруцеллезе крупного рогатого скота являются, в частности, РА, РСК и РИД с О-ПС антигеном и др. [1].
В последние годы в серологической диагностике инфекционных болезней животных все более широкую популярность приобретает иммуноферментный анализ (ИФА). ИФА имеет ряд преимуществ перед классическими методами диагностики, так как позволяет проводить массовые исследования сывороток крови животных за короткий промежуток времени (экспресс-метод), при этом являясь специфичным и высокочувствительным методом серологической диагностики. Постановку и учет ИФА проводят автоматизировано, что исключает субъективность в оценке и интерпретации полученных результатов.
Наборы для иммуноферментного анализа производства IDEXX известны во всем мире и используются для серологической диагностики многих инфекционных болезней животных. Существуют иммуноферментные наборы этой фирмы и для серологической диагностики бруцеллеза, которые успешно применяются для контроля бруцелеза зарубежом [2, 3].
Целью наших исследований являлась объективная оценка возможности использования ИФА тест-системы IDEXX для серологической диагностики бруцеллеза у крупного рогатого скота в стадах на не вакцинированном поголовье с различным эпизоотическим и иммунным статусом по бруцеллезу.
Материалы и методы. В исследованиях была использована диагностическая тест-система ИФА IDEXX Brucellosis Serum Ab Test (Brucellosis Antibody Test Kit), предназначенная для выявления антител к возбудителю бруцеллеза в сыворотках крови крупного рогатого скота.
Постановку ИФА с помощью данной тест-системы осуществляли согласно прилагаемой к набору инструкции.
Учет результатов анализа проводили автоматизировано с использованием специализированного программного обеспечения.

Исследовали индивидуальные сыворотки крови от крупного рогатого скота различного по эпизоотическому и иммунному статусу. Таковыми являлись невакцинированные против бруцеллеза животные благополучных и неблагополучные по бруцеллезу стада.
Все исследованные образцы сывороток крови предварительно подвергли исследованию в общепринятых серологических реакциях (РА, РСК с S- и R-антигенами, РИД с О-ПС антигеном) по общепринятым методикам.
Результаты. В ходе проведенного исследования определялись специфичность и диагностическая чувствительность испытываемой тест-системы ИФА при исследовании сывороток крови не вакцинированного против бруцеллеза крупного рогатого скота с различным эпизоотическим и иммунным статусом (табл.).
Таблица. Результаты исследования в ИФА сывороток крови не вакцинированного против бруцеллеза крупного рогатого скота

п/п 
Серологические тесты
  РА,
МЕ
РСК-S  РСК-R  РИД ИФА   Интерпретация
результатов
ИФА
 1 2 3 4 5 6 7
Благополучные стада
 1 - - - - -1,065  отрицательно
 2  - - - - -1,877  отрицательно
 3 - - - 0,355  отрицательно
 4 - - - -0,761  отрицательно
 5 - - - - 0,863  отрицательно
 6 - - - -  6,038  отрицательно
 7 -  - - - 45,003  отрицательно
 8 - -  - - -2,486  отрицательно
 9 - - - - -5,226  отрицательно
 10 - - - - 7,458  отрицательно
Неблагополучные стада
1 - - н/и + 154,186 положительно 
2  - - н/и + 139, 066 положительно
3     н/и + 181,989 положительно
4     н/и + 127,499 положительно
5     н/и + 120,497 положительно
6     н/и - 64,282 отрицательно 
7     н/и + 173,364 положительно 
 8     н/и + 161,289 положительно 
9 100 1:20 н/и + 218,316 положительно
10 200 1:20 н/и + 214,054 положительно
11 200 1:20 н/и + 228,260  положительно
12 200 1:20 н/и + 233,130  положительно
13 200 1:20 н/и + 242,466  положительно
14 200 1:20 н/и + 222,171  положительно
15 200 1:20 н/и + 235,160 положительно
16 - 1:20 н/и + 229,782  положительно
17 200 1:20 н/и + 203,704 положительно
18 50 1:10 н/и + 202,689 положительно



Установлено, что все исследованные в ИФА 10 проб сывороток крови от крупного рогатого скота благополучных стад (табл.), не подвергавшегося вакцинации против бруцеллеза, с отрицательными результатами в РА, РСК и РИД с О-ПС антигеном, имели низкие значения оптической плотности, подтверждающие отсутствие специфических антител у данной категории животных. Иными словами, полученные результаты подтвердили специфичность показаний тест-системы ИФА.
При исследовании сывороток крови от крупного рогатого скота неблагополучных стад, не подвергавшегося вакцинации, в ИФА, РА, РСК и РИД с О-ПС были получены следующие результаты.
Из 18 анализируемых проб (табл.) 17 образцов сывороток крови в ИФА имели положительный результат.
При этом количество положительных образцов сыворотки крови в отношении возбудителя бруцеллеза, выявленных традиционными методами - РА, РСК и РИД с О-ПС антигеном (в различных сочетаниях), равнялось 10 пробам.
Одна проба сыворотки крови была отрицательна во всех используемых тестах.
Принимая во внимание полученные результаты, становится очевидным, что использованный тест ИФА является более специфичным и чувствительным и его применение повышает выявляемость серопозитивных животных на 41,18%, по сравнению с классическими методами. Данный факт становится особенно актуальным при проведение серологического мониторинга благополучных в отношении бруцеллеза стад, свободных от вакцинации, т.к. позволяет выявлять положительно реагирующих животных вне зависимости от времени и сроков их инфицирования.
Заключение. Тест-система ИФА IDEXX Brucellosis Serum Ab Test (Brucellosis Antibody Test Kit) обладает специфичностью и высокой диагностической чувствительностью.
На неблагополучном по бруцеллезу поголовье крупного рогатого скота, ранее не подвергавшемся вакцинации против бруцеллеза, она позволяет выявлять инфицированных животных из числа животных с положительными показаниями в РА и/или РСК, а также в РИД с О-ПС антигенами в 100 % случаев.
Значительно большая чувствительность ИФА (41,18 %), по сравнению, с классическими методами, делает данный тест хорошим инструментом, способным обнаруживать животных не только в острой фазе инфекционного процесса, но и с хронической формой инфекции, коров в начальной стадии заболевания или переболевших, т.е. тогда, когда диагностический уровень агглютинирующих, комплементсвязывающих и перципитирующих антител еще не достиг своего порога для определения в соответствующих реакциях.
Последнее особенно значимо для недопущения возникновения новых очагов неблагополучия по данной инфекции по причине вывоза и ввоза скота с невысоким уровнем специфических антител и неустановленным статусом здоровья животного.
На основании выше изложенного очевидно, что испытываемая тест-система ИФА IDEXX, обладая специфичностью и высокой диагностической чувствительностью, имеет перспективы широкого использования в ветеринарной практике для диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота среди не подвергавшегося иммунизации против бруцеллеза поголовья. Ее применение особенно целесообразно при контроле эпизоотического благополучия по бруцеллезу. Использование ИФА позволит снизить нагрузку на специалистов серологических отделов ветеринарных лабораторий.
Серологам достаточно будет массового предварительного проведения иммуноферментного анализа. И лишь при необходимости они могут прибегнуть к проведению дополнительных серологических тестов (РА, РСК, РИД) с теми образцами, которые показали сомнительный или положительный результат. Таким образом, существенно сократится время получения результатов.

ЛИТЕРАТУРА

1. Косилов И.А, Аракелян П.К., Димов С.К. и др. Бруцеллез сельскохозяйственных животных / под ред. И.А. Косилова – Новосибирск, 1999. – 344 с.
2. Evaluation of three competitive ELISAs and a fluorescence polarisation assay for the diagnosis of bovine brucellosis / Praud А., Duran-Ferrer M., Fretin D., Jay M., O'Connor M., Stournara A., Tittarelli M., Travassos Dias I., Garin-Bastuji B. // The Veterinary Journal. - 2016. - № 6. - С. 2-20
3. Assessment of the diagnostic sensitivity and specificity of an indirect ELISA kit for the diagnosis of Brucella ovis infection in rams [Электронный ресурс] / Praud А., Champion J-L., Corde Y., Drapeau A., Meyer L., Garin-Bastuji B. // BMC Veterinary Research. - 2012. - Режим доступа : http://bmcvetres.biomedcentral.com/articles/10.1186/1746-6148- 8-68